L’électrophorèse sur gel est un groupe de techniques utilisées pour séparer des molécules, en fonction de leurs propriétés telles que la taille, la forme et le point isoélectrique, dans ce processus les molécules sont séparées en raison de la différence de leur charge nette. Par conséquent, l’électrophorèse sur gel est très efficace pour séparer des mélanges complexes de protéines ou d’autres molécules.
L’appareil d’électrophorèse sur gel comprend plusieurs composants, chacun de ces composants a un rôle clé pour le processus qui se produit lorsque des fragments d’ADN ou de protéines sont exécutés sur le gel. Parmi lesquels :
Coloration et visualisation
Les gels sont généralement colorés avec un produit chimique appelé bromure d’éthidium, qui peut être inséré entre les deux brins sur un fragment d’ADN double brin. Il fleurit brillamment lorsqu’il est lié à l’ADN, exposant ainsi le gel à la lumière ultraviolette rendra les bandes de fragments d’ADN visibles. Parce que la lumière UV est nocive pour les yeux humains, le gel est généralement examiné dans une boîte à lumière ultraviolette appelée transilluminateur. Le gel illuminé par UV est généralement photographié afin que les résultats puissent être analysés plus tard.
Gel
Le gel est utilisé pour l’électrophorèse de fragments d’ADN, il est composé d’agarose, un polymère d’amidon. La préparation du gel consiste simplement à mélanger de la poudre d’agarose avec un bouchon chimique et à la chauffer au micro-ondes ; le gel peut être versé et laissé refroidir. Les protéines sont généralement séparées sur un gel de polyacrylamide. Ce gel est préparé à partir d’un monomère d’acrylamide, avec l’ajout de persulfate d’ammonium et de tétraméthylènedimine à l’acrylamide, le mélange provoque la polymérisation et le durcissement de l’acrylamide.
Réservoir
Le réservoir est en plastique; Il contient un lit de gel dans lequel le gel est placé. De chaque côté se trouvent deux déflecteurs en plastique qui maintiennent le gel en place pendant qu’il refroidit. Une fois le gel solidifié, le réservoir est rempli de tampon de manière à ce que le niveau du tampon soit juste au-dessus du gel ; Le couvercle de la chambre d’électrophorèse contient les électrodes qui alimentent la source de courant de la source d’alimentation, qui maintient une certaine tension. Une fois allumé, les fragments d’ADN chargés négativement commenceront à migrer vers l’électrode positive (anode). L’électrophorèse des protéines est similaire mais le gel est dirigé verticalement.
Peigne et micropipette
Lors du versement du gel, un peigne en plastique est utilisé pour créer de petites dépressions carrées appelées puits. Des échantillons d’ADN seront ensuite chargés dans ces puits à l’aide d’une micropipette. Comme les pipettes plus grandes, une pipette est conçue pour prélever et distribuer un liquide calibré avec précision. Les micropipettes sont généralement réglables afin que l’utilisateur puisse déterminer le nombre de microlitres à ajouter. La solution se trouve dans l’embout de la pipette en plastique, qui n’est généralement utilisée qu’une seule fois avant d’être jetée pour éviter toute contamination.
L’électrophorèse sur gel est utilisée dans de nombreux domaines scientifiques, tels que la génétique, la biologie moléculaire et la biochimie, ainsi que la médecine légale.
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